28°C تي 25 ڏينهن جي جامد انڪيوبيشن کان پوءِ، *Pleurotus ostreats* NRC620 مان ليڪيس فنگل ڪلچر ميڊيم ۾ سڀ کان وڌيڪ سرگرمي ڏيکاري. هن اينزيم لاءِ بهترين pH ۽ گرمي پد جي قيمتون ترتيب وار 3.0 ۽ 70°C هيون. 40°C ۽ 50°C تي 2 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن کان پوءِ، اينزيم جي سرگرمي ترتيب وار 68.33% ۽ 59.61% برقرار رهي. سائٽريٽ-فاسفيٽ بفر (pH 7.0) ۾ 2 ڪلاڪن جي انڪيوبيشن کان پوءِ، اينزيم جي سرگرمي 100% تي رهي. 10 mM MgSO₄ ۽ CuSO₄ جي اضافي سان اينزيم جي سرگرمي ۾ ترتيب وار 21% ۽ 35% اضافو ٿيو، جڏهن ته NaCl، MnCl₂، KCl، ۽ CaCl₂ اينزيم جي سرگرمي کي روڪيو. ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪندي، *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase جا ڪائنيٽڪ پيرا ميٽرز (Km ۽ Vmax) ترتيب وار 1.99 mM ۽ 16,217 μmol min−1 L−1 هئا. سيب جي رس جي نمونن جي اينزيميٽڪ علاج سان پي ايڇ ۽ ويسڪوسيٽي ٻنهي کي خاص طور تي گهٽايو ويو، ۽ هي گهٽتائي اسٽوريج وقت ۾ واڌ سان لاڳاپيل هئي. ليڪيس علاج جي نتيجي ۾ سيب جي رس جي ڪل فينولڪ مواد ۾ معمولي گهٽتائي آئي، پر اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ۾ ڪا به گهٽتائي نه ڏٺي وئي.
تازن سالن ۾، محققن کاڌي جي صنعت ۾ سائي بايو ٽيڪنالاجي جي استعمال تي ڌيان ڏنو آهي. ليڪيس کاڌي جي صنعت ۾ سڀ کان وڌيڪ مفيد اينزائمز مان هڪ آهي، جيڪو جوس پروسيسنگ، بيڪنگ، شراب جي استحڪام، ۽ کاڌي جي شين جي آرگنوليپٽڪ خاصيتن کي بهتر بڻائڻ جهڙن شعبن ۾ استعمال ٿئي ٿو.1ڪيترائي اعليٰ ٻوٽا ۽ مائڪروجنزم ليڪيس خارج ڪن ٿا،2۽ فنگس جهڙوڪ ڊيوٽرومائيسيٽس، ايسڪومائيسيٽس، ۽ بيسيڊيومائيسيٽس پڻ ليڪيس پيدا ڪري سگهن ٿا.3ليڪيس (EC 1.10.3.2) هڪ نيرو آڪسائيڊيس آهي جيڪو ٽن مختلف ٽامي ايٽمن تي مشتمل هڪ نظام استعمال ڪندي ماليڪيولر آڪسيجن کي پاڻي ۾ گھٽائي ٿو، ان ڪري مختلف فينولڪ مرکبات ۽ خوشبودار امائن کي آڪسائيڊ ڪري ٿو. ميوي ۽ سبزي جي رس جي پيداوار دوران، اينزيميٽڪ ۽ غير اينزيميٽڪ براؤننگ نازڪ مسئلا آهن.4جيئن ته اهي شيون رس جي رنگ، ذائقي ۽ خوشبوءَ تي منفي اثر وجهن ٿيون، تنهن ڪري انهن کي هٽائڻ گهرجي.5
سڀني ميون مان، سيب سڄي دنيا ۽ يورپي يونين ۾ سڀ کان وڌيڪ استعمال ڪيا ويندا آهن. 2019 ۾، سيب جي پيداوار عالمي سطح تي ٽئين نمبر تي هئي، جيڪا 87 ملين ٽن کان وڌيڪ هئي.6سيب ۾ ڪيترائي فينولڪ مرڪب هوندا آهن، جن ۾ فليونوائيڊس ۽ فينولڪ ايسڊ جهڙوڪ ڪيفيڪ ايسڊ ۽ ڪلوروجينڪ ايسڊ شامل آهن.7ڇاڪاڻ ته سيب جو رس عام طور تي ان جي صاف شڪل ۾ استعمال ڪيو ويندو آهي، تقريبن 50٪ کان 90٪ فينولڪ جزا فلٽريشن جي عمل دوران ضايع ٿي ويندا آهن.8اڄڪلهه، صارف گهٽ ۾ گهٽ پروسيس ٿيل شين کي چونڊڻ جو رجحان رکن ٿا، جهڙوڪ بادل وارو سيب جو رس جنهن ۾ پولي فينول جو مقدار وڌيڪ هجي. جڏهن ته، ان جي اعليٰ فينولڪ مواد جي ڪري، هن قسم جو سيب جو رس خاص طور تي رنگ بدلائڻ ۽ ڪارو ٿيڻ لاءِ حساس هوندو آهي.9سيب جي رس جي ڪارو ٿيڻ کي گهٽائڻ يا روڪڻ لاءِ مختلف ٽيڪنالاجيون استعمال ڪيون وينديون آهن، جن ۾ گرمي علاج جا طريقا جهڙوڪ 60-90 ° C تي پيسٽورائيزيشن شامل آهن.10بهرحال، Sauceda-Gálvez جي تحقيق مطابق11، حرارتي پروسيسنگ غير مستحڪم ڪيميائي کي تباهه ڪري سگهي ٿي ۽ سيب جي رس جي آرگنوليپٽڪ خاصيتن کي متاثر ڪري سگهي ٿي. حرارتي پروسيسنگ طريقن جي متبادل ۾ سپر ڪرٽيڪل ڪاربن ڊاءِ آڪسائيڊ، الٽراوائليٽ تابڪاري، الٽراسائونڊ، هاءِ هائيڊرو اسٽيٽڪ پريشر، يا هاءِ پريشر هوموجنائيزيشن شامل آهن.12انهن ٽيڪنالاجي جي ڪارڪردگي ۽ مناسب ميوي جي رس جي پيداوار استعمال ٿيل پيرا ميٽرز ۽ پيداوار جي خاصيتن تي منحصر آهي. انهن جي وسيع استعمال کي اعلي قيمتن، ڪجهه کاڌي جي شين جي معيار تي خراب اثرات، يا اينزائم جي غير فعال ٿيڻ جي ڪري محدود ڪيو ويو آهي.13,14
لِيڪيس کي ميوي جي رس کي مستحڪم ۽ صاف ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو.15گوڪمن ۽ ٻيا.16ميوي جي رس جي وضاحت لاءِ ليڪيس جي استعمال جي سفارش ڪريو ڇاڪاڻ ته اهو مؤثر طريقي سان فينولڪ مرکبات کي پوليمر يا اوليگومر ۾ تبديل ڪري ختم ڪري ٿو جيڪي ڪنهن به الٽرا فلٽريشن جھلي ذريعي آساني سان هٽائي سگهجن ٿا، سيب جو رس 50 ° C تي ڇهن هفتن تائين مستحڪم رنگ ۽ وضاحت برقرار رکڻ جي اجازت ڏئي ٿو. صاف ٿيل *ٽرائڪوڊرما* ليڪيس کي ايلومينينا موتي تي متحرڪ ڪيو ويو ۽ سيب جي رس جي مائڪروبيل آلودگي جي ڪري پيدا ٿيندڙ غير ذائقي مرکبات کي چونڊيل طور تي ختم ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو.17
سيب جي رس جي لڳ ڀڳ 80-90 سيڪڙو غير مستحڪم جز ايسٽر ۽ الڊي هائيڊ آهن، جيڪي رس کي هڪ منفرد خوشبو ڏين ٿا.18سيب جي رس جي وضاحت لاءِ *ٽراميٽس ورسيڪلر* مان لِيڪيس کي نوجوان ناريل جي ڇالن مان قدرتي فائبر مان ٺهيل هڪ سستي سپورٽ تي متحرڪ ڪيو ويو.19اڳوڻي مطالعي ۾ اينزائم کان پاڪ يا متحرڪ طريقن سان، يا الٽرا فلٽريشن سان گڏ، سيب جي رس جي استحڪام (رنگ ۽ گندگي) جي جاچ ڪئي وئي آهي.5,19جڏهن ته، اسٽوريج دوران سيب جي رس جي جسماني ڪيميڪل خاصيتن تي فنگل ليڪيسس جو اثر اڃا تائين واضح ناهي. تنهن ڪري، هن مطالعي جو مقصد فنگل ليڪيسس سان علاج ۽ ٻن هفتن جي ريفريجريٽريڊ اسٽوريج کان پوءِ سيب جي رس جي جسماني ڪيميڪل خاصيتن، فينولڪ مرڪب جي مواد ۽ اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ۾ تبديلين جي تجرباتي طور تي جاچ ڪرڻ هو. ليڪيسس ۾ فينولڪ مرکبات کي آڪسائيڊ ڪرڻ جي صلاحيت هوندي آهي، جيڪا انهن کي مختلف صنعتي عملن ۾ استعمال لاءِ واعدو ڪندڙ بڻائي ٿي، جنهن ۾ رس جي وضاحت شامل آهي. هن مطالعي ۾ *Pleurotus ostreats* NRC 620 مان ليڪيسس جو معائنو ڪيو ويو، انهن جي سرگرمي ۽ رس جي وضاحت ۾ اثرائتي لاءِ مثالي حالتن تي ڌيان ڏنو ويو. جڏهن ته اويسٽر مشروم (P. ostreats NRC 620) تي تحقيق اڃا تائين محدود آهي، پوئين مطالعي ۾ مختلف فنگل ذريعن، جهڙوڪ ٽراميٽس ورسيڪلر ۽ گانوڊرما لوسيڊم مان اينزائمز جو معائنو ڪيو ويو آهي. هن مطالعي جو مقصد کاڌي جي صنعت ۾ هن اينزائم جي امڪاني استعمال جو جائزو وٺڻ ۽ ان جي منفرد خاصيتن کي اجاگر ڪرڻ هو، خاص طور تي ان جي مثالي پي ايڇ ۽ درجه حرارت.
2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) سگما-الڊرچ (ڪينيڊا) کان خريد ڪيو ويو هو. ٻيا سڀئي ريجنٽ تجزياتي گريڊ جا هئا.
نيشنل ريسرچ سينٽر جي مائڪروبيل ڪلچر ڪليڪشن سينٽر کي اويسٽر مشروم جي ڄاتل سڃاتل قسم NRC620 حاصل ٿيو. ذيلي ڪلچر کان پوءِ، هن قسم کي آلو ڊيڪسٽروز آگر سلينٽس تي 4 °C تي ذخيرو ڪيو ويو. انوڪولم تيار ڪرڻ جو طريقو هن ريت هو: 10 ڏينهن پراڻو، مڪمل طور تي ترقي يافته مائيسيليم کي آلو ڊيڪسٽروز آگر پليٽن تي انڪوليٽ ڪيو ويو ۽ 28 °C تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو. 10 ڏينهن کان پوءِ، ٽي 12 ملي ميٽر قطر جا مائيسيليئل بلاڪ هڪ جراثيم کان پاڪ ڌاتو پنچ استعمال ڪندي آگر ميڊيا مان ڪڍيا ويا ۽ 250 ملي ميٽر جي ارلن ميئر فلاسڪس ۾ ڪپهه جي پلگ سان رکيا ويا جن ۾ 50 ايم ايل جراثيم کان پاڪ ڪلچر ميڊيم (پي ايڇ 5.0، جيئن اڳ عثمان وغيره پاران بيان ڪيو ويو آهي) شامل هئا.20). ڪلچرن کي 18 ڏينهن لاءِ 28°C تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو. پوءِ ڪلچرن کي واٽمن نمبر 1 فلٽر پيپر ذريعي فلٽر ڪيو ويو، ۽ نتيجي ۾ پيدا ٿيندڙ سپرنيٽينٽ اينزائم ذريعو طور ڪم ڪيو.
ليڪيس سرگرمي کي ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو. رد عمل جي مرکب (2 mL) ۾ 0.3 mM ABTS جو 500 μL (0.1 M سوڊيم سائٽريٽ بفر، pH 4.5 ۾ حل ٿيل) ۽ ڊسٽل ٿيل پاڻي سان ملائي اينزائم نموني جي گهربل مقدار شامل هئي.21,22انهي ڳالهه کي نظر ۾ رکندي ته ليڪيس ڪمري جي حرارت (28 °C ± 2) تي ABTS کي آڪسائيڊ ڪري سگهي ٿو، ABTS آڪسائيڊشن جو تعين 420 nm (ε) تي جذب ۾ واڌ کي ماپڻ سان ڪيو ويو.420= 36,000 سينٽي ميٽر-1 M -1) ايجيلينٽ ڪيري-100 يو وي اسپيڪٽرو فوٽوميٽر استعمال ڪندي. ليڪيس سرگرمي جي هڪ يونٽ کي 1 μmol ABTS في منٽ آڪسائيڊ ڪرڻ جي ضرورت هئي. پروٽين جي ڪنسنٽريشن کي اندروني ڪنٽرول طور بووائن سيرم البومين استعمال ڪندي بريڊفورڊ طريقي سان طئي ڪيو ويو.23,24
اويسٽر مشروم جي قسم NRC 620 مان اينزائم حاصل ڪرڻ کان پوءِ، ان جي سرگرمي کي 28 °C تي جامد حالتن ۾ 25 ڏينهن تائين مختلف پوک جي وقفن تي ماپيو ويو.
ليڪيس سرگرمي تي گرمي پد جي اثر جو مطالعو ڪرڻ لاءِ، 20 کان 90 °C جي درجه حرارت جي حد ۾ تجربا ڪيا ويا. اينزائم شامل ڪرڻ ۽ رد عمل شروع ڪرڻ کان اڳ، بفر (0.1 M سوڊيم سائٽريٽ، pH 4.5) ۽ سبسٽريٽ (ABTS) کي ملايو ويو ۽ مختلف درجه حرارت تي 5 منٽن لاءِ انڪيوبيٽ ڪيو ويو. اينزائم جي حرارتي استحڪام جو جائزو 0.05 M سوڊيم فاسفيٽ بفر (pH 7.0) ۾ 40، 50، 60، ۽ 70 °C تي ترتيب وار 2 ڪلاڪن لاءِ انڪيوبيشن ذريعي ڪيو ويو. پوءِ ABTS سبسٽريٽ استعمال ڪندي باقي سرگرمي جو جائزو ورتو ويو.
ليڪيس سرگرمي تي پي ايڇ جو اثر ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪندي 0.1 M سائٽريٽ-فاسفيٽ بفرز ۾ 2.5 کان 7.0 جي pH رينج سان جانچيو ويو. اينزائم محلول کي 0.1 M سائٽريٽ ۽ ٽريس بفرز (pH 3، 4، 6، ۽ 7) ۾ ٻن ڪلاڪن لاءِ 40°C تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو ته جيئن pH جي استحڪام جو جائزو ورتو وڃي. انڪيوبيشن کان پوءِ سبسٽريٽ طور ABTS سان باقي سرگرمي جو حساب ڪيو ويو.
ليڪيس کي 10 منٽن لاءِ سوڊيم فاسفيٽ بفر (0.05 M، pH 7.0) ۾ مختلف ڌاتو آئن (Mg2+، Cu2+، Co2+، Ca2+، Zn2+، K+، Na+، ۽ Mn2+) تي ترتيب وار 2.5 mM ۽ 10 mM جي ڪنسنٽريشن تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو. پوءِ رد عمل شروع ڪرڻ لاءِ سبسٽريٽ (ABTS) شامل ڪيو ويو، ۽ لاڳاپيل سرگرمي جو جائزو ورتو ويو.
مختلف ڪنسنٽريشنز (0.025–3 mM) تي ليڪيس ذريعي ABTS آڪسائيڊيشن کي pH 4.5 تي ماپيو ويو ته جيئن ڪائنيٽڪ پيرا ميٽرز (Vmax ۽ Km) کي طئي ڪري سگهجي. ڪائنيٽڪمستقلمائيڪلس-مينٽن مساوات جا حساب لائن ويور-برڪ پلاٽ استعمال ڪندي ڪيا ويا، جيڪو رد عمل جي شرح جي باهمي کي سبسٽريٽ ڪنسنٽريشن جي ڪم جي طور تي پلاٽ ڪري ٿو. گراف پيڊ پرزم ورزن 6.01 سافٽ ويئر استعمال ڪندي لائن ويور-برڪ پلاٽ مان ڪائنيٽڪ مستقلن جو حساب ڪيو ويو.
سيب کي نل جي پاڻي سان چڱيءَ طرح ڌوئڻ کان پوءِ، انهن کي اڌ ۾ ڪٽيو ويو ۽ مڪمل طور تي خودڪار براؤن MP80 ايپل جوسر (جرمني ۾ ٺهيل) استعمال ڪندي رس ڪڍيو ويو. رس کي چيز ڪلوٿ جي چئن تہن ذريعي فلٽر ڪيو ويو. ڪنٽرول گروپ ۾ ڪو به اينزائم شامل نه ڪيو ويو، جڏهن ته 2.0٪ ليڪيس (سڀ کان وڌيڪ اثرائتي ڪنسنٽريشن ٽيسٽ ڪئي وئي) تازي تيار ڪيل سيب جي رس ۾ شامل ڪئي وئي، جنهن کي پوءِ ٻن هفتن لاءِ 4 ° C تي محفوظ ڪيو ويو.
ٽائيٽريبل ايسڊٽي (TA) ۽ پي ايڇ بولٽن ۽ ٽيڪنيڪل جي طريقي مطابق طئي ڪيا ويا.الف.27. هر نموني جي پي ايڇ کي ڊجيٽل پي ايڇ ميٽر (JENWAY 3510 پي ايڇ ميٽر) استعمال ڪندي ماپيو ويو. ٽائيٽريبل ايسڊٽي (TA) کي هيٺ ڏنل فارمولا استعمال ڪندي ماليڪ ايسڊ جي بنياد تي ڳڻيو ويو.
جتي V ۽ C ترتيب وار ٽائيٽريشن ۾ استعمال ٿيندڙ سوڊيم هائيڊرو آڪسائيڊ محلول جو حجم (mL) ۽ ڪنسنٽريشن (0.1 mol/L) آهن. K ماليڪ ايسڊ ڪنورشن ڪوفيشيٽ آهي، جيڪو 0.067 جي برابر آهي، ۽ W سيب جي رس جو ماس (g) آهي.
ڪُل حل ٿيندڙ جامد شيون (ٽي ڊي ايس) سڀني رس جي نمونن جي مواد کي PAL-1 پاڪيٽ ريفريڪٽوميٽر (ATAGO، ٽوڪيو، جاپان) استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو. هر ماپ کان پوءِ، آپٽيڪل لينس کي ڊيونائيزڊ پاڻي سان ڌوئيو ويو، ۽ هر سيب جي رس جي نموني کي ٽي ڀيرا جانچيو ويو. هر نموني جي قيمت ٽن ماپن جي اوسط سان حساب ڪئي وئي. هر سيب جي رس جي نموني لاءِ اوسط ± معياري انحراف پڻ انهن نتيجن جي اوسط سان حساب ڪيو ويو.
سيب جي رس جي نمونن جي ويسڪوئلاسٽڪٽي جو جائزو گردش ڪندڙ ويسڪوميٽر (RV، Rheotest 2، جرمني) استعمال ڪندي ڪيو ويو. نمونو ويسڪوميٽر جي "S2" سلنڈر اندر رکيو ويو. ظاهري ويسڪوسيٽي کي شيئر اسٽريس جي سلوپ بمقابله شيئر ريٽ وکر جي نمائندگي ڪئي وئي، جيڪو شيئر اسٽريس ۽ لاڳاپيل وکر مان مختلف شيئر ريٽس تي حساب ڪيو ويو (1.00 کان 437.4 s⁻¹ تائين). ظاهري ويسڪوسيٽي جي حساب لاءِ فارمولا هيٺ ڏنل آهي:
جتي η ظاهري ويسڪوسيٽي (cP) آهي، τ شيئر اسٽريس (dyn/cm²) آهي، γ شيئر ريٽ (sec⁻¹) آهي، ۽ (τ) کي هيٺ ڏنل فارمولا استعمال ڪندي ٽورڪ (α) ۽ سلنڈر (Z) قدرن کي استعمال ڪندي ڳڻيو ويندو آهي: τ = Z. α.
براؤننگ انڊيڪس ميداو ايٽ جي طريقي مطابق طئي ڪيو ويو.الف.29. 10-ml رس جي نموني کي 10 منٽن لاءِ 2750 xg تي سينٽرفيوج ڪيو ويو. رس سپرنيٽينٽ جي 5 ml کي 95٪ ايٿانول جي 5 ml سان ملايو ويو. مرکب جي جذب کي شيماڊزو يو وي اسپيڪٽرو فوٽوميٽر (UV-1601 PC) استعمال ڪندي 420 nm تي ماپيو ويو.
ڪُل فينولڪ مواد (TPC) کي بولٽن ۽ ٻين پاران بيان ڪيل فولين-سيوڪلٽيو ري ايجنٽ استعمال ڪندي رنگي ميٽرڪ طور تي طئي ڪيو ويو.[27]]. 0 کان 500 mg/L تائين ڪنسنٽريشن لاءِ گيلڪ ايسڊ جو هڪ معياري وکر ٺاهيو ويو هو (ر²= 0.997). نتيجا گيلڪ ايسڊ جي برابر (mg GAE/mL) طور ظاهر ڪيا ويا آهن.
25 μL سيب جي رس ۾ 125 μL ڊسٽل پاڻي ۽ 2850 μL FRAP محلول شامل ڪريو ۽ مرکب کي اونداهي ۾ ڇڏي ڏيو.30گھٽ ۾ گھٽ. پوءِ شيماڊزو يو وي اسپيڪٽرو فوٽوميٽر (UV-1601 پي سي) استعمال ڪندي 593 اين ايم تي جذب کي ماپيو. FRAP ري ايجنٽ 300 ايم ايم ايسٽيٽ بفر (pH 3.6)، 20 ايم ايم آئرن (III) ڪلورائڊ، ۽ 10 ايم ايم 2,4,6-ٽريس (2-پائريڊيل) ٽرائيزائن (TPTZ) (40 ايم ايم ايڇ سي ايل ۾ حل ٿيل) کي 10:1:1 جي تناسب سان ملائي تيار ڪيو ويو. ٽرولوڪس کي معياري طور استعمال ڪندي هڪ معياري وکر پيدا ڪيو ويو (آر 2= 0.999)، ۽ نتيجا μM ٽرولوڪس/mL طور ظاهر ڪيا ويا آهن.
علاج ٿيل ۽ علاج نه ٿيل جوس جي اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي کي DPPH طريقو استعمال ڪندي طئي ڪيو ويو ته جيئن DPPH آزاد ريڊيڪلز کي ختم ڪرڻ جي انهن جي صلاحيت جو جائزو ورتو وڃي.31ڏهه مائڪروليٽر رس کي 1 ملي ليٽر DPPH محلول (100 μM) ميٿانول ۾ ملايو ويو. 30 منٽن تائين اونداهي ۾ رد عمل کان پوءِ، مرکب جي جذب کي شيماڊزو يو وي اسپيڪٽرو فوٽوميٽر (UV-1601 PC) استعمال ڪندي 517 nm تي ماپيو ويو. نتيجن کي ڪيليبريشن وکر جي بنياد تي ٽرولاڪس برابر (μM ٽرولاڪس/ml) طور ظاهر ڪيو ويو (R2= 0.990).
حاصل ڪيل ڊيٽا ڏيکاري ٿي ته خمير جي 18 هين ڏينهن جي آخر تائين NRC 620 اويسٽر مشروم ۾ وڌ ۾ وڌ ليڪيس پيداوار ڏٺي وئي، جيڪا 1302 U/L جي سرگرمي تائين پهچي وئي. اهو ليڪيس پيداوار لاءِ بهترين پوک جي وقت کي طئي ڪرڻ لاءِ بنياد طور ڪم ڪيو (شڪل 1). جيتوڻيڪ اينزائم جي پيداوار وڌندڙ پوک جي وقت سان وڌي وئي، واڌ جي شرح سڌي طرح پوک جي وقت جي متناسب نه هئي؛ 21 ڏينهن کان پوءِ، اينزائم جي سرگرمي صرف 90 U/L (1390 U/L تائين) وڌي وئي هئي. تنهن ڪري، 18 ڏينهن آخرڪار پيداوار جي پيداوار کي وڌندڙ پوک جي وقت جي اقتصادي فائدن سان متوازن ڪرڻ لاءِ بهترين پوک جي وقت طور چونڊيو ويو.
پليوروٽس اوسٽريٽس اين آر سي 620 ۾ ليڪيس جي پيداوار تي پوک جي وقت جو اثر. ٽي (12 ملي ميٽر) فنگل مائيسيليئل بلاڪ 50 ملي ليٽر جراثيم کان پاڪ وچولي ۾ داخل ڪيا ويا ۽ پوءِ مختلف وقتن لاءِ 28 °C تي ڪلچر ڪيا ويا.
ٻين مطالعي سان مطابقت رکندڙ، اسان جا نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته فنگس پاران ليڪيس جي اخراج جي چوٽي حاصل ڪرڻ لاءِ مثالي ڪلچر جو عرصو 7 ۽ 36 ڏينهن جي وچ ۾ هجڻ جو امڪان آهي.32ايزڪ ۽ ٻين جي مطابق.33، *ٽراميٽس پولي زونا* WRF03 خمير جي نائين ڏينهن جي آخر تائين سڀ کان وڌيڪ مقدار ۾ ليڪيس پيدا ڪيو، جنهن جي مخصوص سرگرمي 1637 U/mg پروٽين هئي. وڌيڪ، عثمان ۽ ٻيا.34ڏٺائين ته *ٽرائڪوڊرما هارزيانم* S7113 ڪلچر جي پنجين ڏينهن تي وڏي مقدار ۾ ليڪيس خارج ڪيو. ليڪيس جي پيداوار جي شرح چوڏهين ڏينهن تي پنهنجي عروج تي پهتي ۽ پوءِ آهستي آهستي گهٽجي وئي.34جيتوڻيڪ اينزائم جو اخراج مکيه واڌ جي مرحلي دوران به ٿي سگهي ٿو، پر اهو عام طور تي وچولي مرحلي دوران عروج تي پهچي ٿو ۽ ڪاربان يا نائٽروجن جي ذريعن جي استعمال سان شروع ٿئي ٿو.34,35
جيتوڻيڪ پليوروٽس اوسٽريٽس اين آر سي 620 مان لِڪيس 50 ° سي کان 80 ° سي تائين وسيع درجه حرارت جي حد تي اعليٰ سرگرمي ڏيکاري، چوٽي جي سرگرمي (69-98٪) جي ويجهو، ان جي وڌ ۾ وڌ سرگرمي 70 ° سي تي ڏٺي وئي (شڪل 2a). هن درجه حرارت جي حد کان ٻاهر، اينزائم جي سرگرمي تقريبن 70 ° سي تي گهٽجي وئي. اهي نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته اينزائم اعليٰ درجه حرارت تي سرگرم آهي، ممڪن آهي ڇاڪاڻ ته اعليٰ درجه حرارت رد عمل جي حرڪي توانائي کي وڌائي ٿو.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 ۾ ليڪيس سرگرمي تي رد عمل جي درجه حرارت (a) ۽ pH (b) جو اثر. اينزائم شامل ڪرڻ ۽ رد عمل شروع ڪرڻ کان اڳ 5 منٽن لاءِ مختلف درجه حرارت تي مرکب کي اڳ ۾ انڪيوبيٽ ڪرڻ سان 20 کان 90 °C تائين گرمي پد حاصل ڪيو ويو. ليڪيس سرگرمي تي pH جي اثر جو جائزو ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪندي حل ۾ 0.1 M سائٽريٽ-فاسفيٽ بفر تي 2.5 کان 7.0 جي pH رينج تي ڪيو ويو.
ايزڪ ۽ ٻين جي مطابقالف.33، *ٽراميٽس پوليزونا* WRF03 ليڪيس لاءِ بهترين گرمي پد 55 °C آهي، جيڪو *گانوڊرما لوسيڊم* جي برابر آهي.لَڪَيس 36۽ *ٽراميٽس پوليزونا* KU-RNW02737 لاءِ بهترين گرمي پد (50 °C) جي برابرلَڪَيس . بالڊرين 38نوٽ ڪري ٿو ته، ٻين لگنين کي خراب ڪندڙ اينزائم سسٽم وانگر، ليڪيس لاءِ مثالي درجه حرارت جي حد 50 ۽ 70 °C جي وچ ۾ آهي.
نتيجن مان ظاهر ٿيو ته اينزائم pH 3.0 تي سڀ کان وڌيڪ سرگرمي ڏيکاري، pH 3.5 تي 94٪ سرگرمي تائين پهچي ويو. بهرحال، اهو 2.5 کان 7.0 تائين وسيع pH رينج تي سرگرم رهيو (شڪل 2b). ان کان علاوه، اهو غير جانبدار يا الڪلائن حالتن جي مقابلي ۾ تيزابي حالتن ۾ وڌيڪ سرگرمي ڏيکاري. ان جي سرگرمي 2.5 کان 4.5 تائين pH رينج تي گهٽ ۾ گهٽ 77٪ رهي، پر pH 7.0 تي صرف تقريبن 38٪ تائين پهچي وئي. *Trametes polyzona* WRF03 مان laccase لاءِ بهترين pH 4.533 هو، جيڪو *Trametes polyzona* KU-RNW02737، *Trichoderma harzanium* 39، *Pleurotus* sp. 40، ۽ *Trametes hirsuta* 41 مان laccases لاءِ pH جي برابر آهي. بهرحال، چيئرين ۽ ٻين جي مطالعي مطابق.42، *پوليمورفا f. sp.* WR710-1 مان لِيڪيس لاءِ بهترين پي ايڇ 2.2 آهي، جڏهن ته *پوليمورفا f. sp.* IBL-04 مان لِيڪيس لاءِ بهترين پي ايڇ 5.043 آهي. T2/T3 لِيڪيس جي ٽامي جي ايٽمن سان هائيڊرو آڪسائيڊ اينائنز (لِيڪيس انبيٽر) جو پابند ٿيڻ غير جانبدار يا الڪلائن پي ايڇ حالتن هيٺ لِيڪيس سرگرمي ۾ گهٽتائي جو سبب ٿي سگهي ٿو. اهو T1 مرڪز کان T2/T3 مرڪز ڏانهن اندروني اليڪٽران جي منتقلي کي خراب ڪري سگهي ٿو، انهي ڪريمحدود ڪرڻاينزائم سرگرمي 23,44
مختلف گرمي پد تي اينزائم کي انڪيوبيٽ ڪرڻ سان، اهو معلوم ٿيو ته انڪيوبيشن وقت ۽ گرمي پد ٻنهي اينزائم جي استحڪام کي متاثر ڪيو. خاص طور تي، *Trametes polyzona* NRC 620 مان ليڪيس 40 ℃ ۽ 50 ℃ تي وڌيڪ استحڪام ڏيکاريو، 120 منٽن کان پوءِ ترتيب وار 68.33٪ ۽ 59.61٪ پنهنجي شروعاتي سرگرمي کي برقرار رکيو (شڪل 3a). ان جي ابتڙ، ساڳئي حالتن ۾ (40 ℃ ۽ 50 ℃، 120 منٽ)، *Trametes polyzona* WRF03 مان ليڪيس پنهنجي سرگرمي جو ترتيب وار 64.38٪ ۽ 42.92٪ برقرار رکيو.33ان جي برعڪس، انڪيوبيشن وقت ۽ گرمي پد ۾ واڌ *ٽريميٽس پولي زونا* NRC 620 ليڪيس جي استحڪام کي گهٽائي ڇڏيو؛ 60 ℃ ۽ 70 ℃ تي 60 منٽن لاءِ انڪيوبيشن کان پوءِ، ان جي سرگرمي ترتيب وار 39.24٪ ۽ 1.72٪ تائين گهٽجي وئي (شڪل 3a). تجرباتي نتيجن سان مطابقت، *ٽريميٽس پولي زونا* WRF03 مان ليڪيس سڄي حرارتي علاج جي عمل دوران 40 ۽ 50 ℃ تي وڌيڪ استحڪام ڏيکاريو.33ساڳئي طرح، Lueangjaroenkit وغيرهالف.37۽ چيئرين وغيرهالف.42ٽراميٽس پولي زونا KURNW027 ۽ ٽراميٽس پولي زونا WR710-1 مان ليڪيز جي استحڪام جي رپورٽ 50 °C تي 1 ڪلاڪ لاءِ ترتيب وار ڪئي وئي. مختلف بايو ٽيڪنالاجي شعبن ۾ لاڳو ٿيندڙ هڪ مفيد بايو ڪيٽيلسٽ جي طور تي، ليڪيز کي وسيع درجه حرارت جي حد تي سٺي استحڪام ۽ ڪارڪردگي هجڻ گهرجي.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 مان ليڪيس جي ٿرموسٽيٽڪ استحڪام (a) ۽ pH استحڪام (b). ٿرموسٽيٽڪ استحڪام جو جائزو 0.05 M سوڊيم فاسفيٽ بفر (pH 7.0) ۾ 40، 50، 60، ۽ 70 °C تي ترتيب وار 2 ڪلاڪن لاءِ انڪيوبيٽ ڪندي ڪيو ويو. pH استحڪام جو جائزو 0.1 M سائٽريٽ بفر ۽ ٽريس بفر (pH 3، 4، 6، ۽ 7) ۾ 40 °C تي 2 ڪلاڪن لاءِ انڪيوبيٽ ڪندي ڪيو ويو. انڪيوبيشن کان پوءِ سبسٽريٽ طور ABTS استعمال ڪندي باقي سرگرمي جو حساب لڳايو ويو.
اينزائم جي استعمال ۽ اسٽوريج لاءِ بهترين حالتن جو تعين ڪرڻ لاءِ، اسان ليڪيس جي استحڪام تي پي ايڇ جي اثر جي جاچ ڪئي. مختلف پي ايڇ قدرن جي نمائش پروٽين جي جوڙجڪ جي استحڪام کي خاص طور تي متاثر ڪيو، ان ڪري اينزائم ماليڪيول جي استحڪام ۽ سرگرمي کي متاثر ڪيو. نتيجن مان ظاهر ٿيو ته اينزائم تيزابي حالتن ۾ گهٽ مستحڪم هو، جڏهن ته ان وڌيڪ پي ايڇ قدرن (غير جانبدار ۽ الڪلين علائقن) تي بهتر استحڪام جو مظاهرو ڪيو. 7.0، 6.0، 4.0، ۽ 3.0 جي پي ايڇ قدرن تي، 120 منٽن کان پوءِ اينزائم برقرار رکڻ جي شرح تقريبن 100٪، 62.54٪، 52.39٪، ۽ 11.14٪ هئي، ترتيب وار (شڪل 3b). *اسٽرومبس ملٽيسس* WRF03 ليڪيس غير جانبدار پي ايڇ قدرن (5.5-6.5) تي وڌيڪ استحڪام ۽ تيزابي پي ايڇ قدرن (4.0 کان هيٺ) تي گهٽ استحڪام ڏيکاريو. 5.5، 6.0، ۽ 6.5 جي pH قدرن تي 120 منٽن کان پوءِ، اينزائم جي برقرار رکڻ جي شرح تقريبن 82٪، 100٪، ۽ 93٪ هئي، ترتيب وار.33خيرين ۽ ٻيا.42نوٽ ڪيو ته ٽراميٽس پولي زونا WR710-1 مان ليڪيس 6.0 کان 7.0 جي پي ايڇ رينج ۾ مستحڪم هو، جڏهن ته سيد ۽ ٻيا.45ڏيکاريو ته ليڪيس غير جانبدار پي ايڇ حالتن ۾ وڌيڪ مستحڪم هو. جڏهن ته، سيرينا يوني ڪلر مان ليڪيس پڻ الڪلائن حالتن ۾ استحڪام ڏيکاريو (pH 9.0)46. مطالعي ڪيل ليڪيسس وسيع پي ايڇ رينج تي اعليٰ استحڪام ڏيکاريو. هي صنعتي ايپليڪيشنن لاءِ هڪ اهم خاصيت ٿي سگهي ٿي.
جيئن ته ڪجهه ڌاتو آئنن ۾ اينزائم جي سرگرمي تي محرڪ ۽ روڪٿام وارا اثر ٻئي هوندا آهن، صنعتي استعمال ۾ اينزائم جي سرگرمي تي انهن جي اثرن تي غور ڪرڻ گهرجي. اهو انتهائي اهم آهي ڇاڪاڻ ته ڌاتو آئن عام ماحولياتي آلودگي آهن جيڪي خارجي سيل اينزائمز جي استحڪام ۽ ترکیب کي متاثر ڪري سگهن ٿا.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 مان لِيڪيس تي گھڻن ڌاتو آئنن جي اثرن جي جاچ ڪرڻ لاءِ، اسان لاڳاپيل تجربا ڪيا. جيئن شڪل 4 ۾ ڏيکاريل آهي، استعمال ٿيل ڌاتو جي قسم تي منحصر ڪري، ڌاتو آئن ڪنسنٽريشن کي 2.5 mM کان 10 mM تائين وڌائڻ اينزائم جي ڪم کي منفي طور تي متاثر ڪيو. مثال طور،مگ ²⁺ , ڪو²⁺ , زين ²⁺، ۽ڪيو ²⁺اينزائم جي سرگرمي کي متحرڪ ۽ چالو ڪري سگھي ٿو، جڏهن تهنا⁺ , مِني ²⁺ , Ca²⁺، ۽ڪ⁺اينزائم جي سرگرمي کي روڪي سگھي ٿو. 10 ملي ميٽر جي ڪنسنٽريشن تي، *Pleurotus ostreatus* NRC 620 مان Cu²⁺ ۽ Mg²⁺ آئن ليڪيس جي سرگرمي جا سڀ کان وڌيڪ طاقتور ايڪٽيويٽر هئا، جيڪي ترتيب وار تقريبن 34٪ ۽ 20٪ جي ايڪٽيويشن ڊگري فراهم ڪندا هئا. جڏهن ته، 10 ملي ميٽر جي ڪنسنٽريشن تي، Ca²⁺ آئن ليڪيس جي سڀ کان وڌيڪ طاقتور انابيٽر هئا، جيڪي اينزائم جي سرگرمي کي تقريبن 60٪ گهٽائي ڇڏيندا هئا.
ڌاتو آئنن جو پليوروٽس اوسٽريٽس اين آر سي 620 ليڪيس جي سرگرمي تي اثر. ليڪيس کي 10 منٽن لاءِ سوڊيم فاسفيٽ بفر (0.05 ايم، پي ايڇ 7.0) ۾ انڪيوبيٽ ڪيو ويو جنهن ۾ 2.5 ايم ايم ۽ 10 ايم ايم جي ڪنسنٽريشن تي مختلف ڌاتو آئن شامل هئا. پوءِ رد عمل سبسٽريٽ (ABTS) جي اضافي سان شروع ڪيو ويو، جنهن کان پوءِ لاڳاپيل سرگرمي ماپي وئي.
اسان جا نتيجا ٻين ليکڪن سان مطابقت رکن ٿا جن اهو معلوم ڪيو ته Mg²⁺ ۽ Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ جي سرگرمي کي وڌائين ٿا. Castaño et al.⁴⁸ اهو معلوم ڪيو ته *Xylaria* sp مان ليڪيس ڪجهه حد تائين ڪاپر آئنز (Cu²⁺) ذريعي متحرڪ ٿئي ٿو. ان کان علاوه، Foroutanfar et al.⁴⁹ ۽ Si et al.⁵⁰ ترتيب وار *Paraconiothyrium variabile* ۽ *Trametes pubescens* مان ليڪيس تي ساڳيا اڀياس ڪيا. هن اينزائم جي قسم II ڪاپر-بائنڊنگ سائيٽ (T2) کي ڏنل ڪنسنٽريشن تي Cu²⁺ سان سير ڪري سگهجي ٿو، جيڪو شايد وڌيڪ Cu²⁺³⁹ ڪنسنٽريشن تي ليڪيس سرگرمي جي محرڪ جي وضاحت ڪري سگهي ٿو. جيئن ته اڇي سڙيل فنگس ليڪيسز آڪسائيڊيسز آهن جن ۾ ڪيترائي ڪاپر ايٽم شامل آهن، ليڪيسز جي سرگرمي تي ڪاپر آئنز جا اثر متنوع آهن ۽ محرڪ ۽ روڪڻ کان وٺي غير جانبدار تائين آهن.⁵¹ ان جي ابتڙ، زو ۽ ٻيا[52]رپورٽ ڪيو تهڪيو ²⁺تائيوان جي زير زمين دیمک (Odontotermes formosanus) جي ليڪيس سرگرمي کي روڪيو. جڏهن ته، سيرينا اسپ. HYB07 جا ليڪيس[53]۽ ڪليٽوسائيب ميڪسيما[54]ٽامي جي آئنن کان متاثر نه ٿيا.
سبسٽريٽ جي خاصيت ان جي حرڪي پيرا ميٽرز (ڪلوميٽر ۽ وي ميڪس) ذريعي ظاهر ڪئي وئي؛ اينزائم سان سبسٽريٽ جي پابند لاڳاپي جيتري مضبوط هوندي، ڪلوميٽر جي قيمت گهٽ هوندي ۽ سبسٽريٽ جي خاصيت اوتري وڌيڪ هوندي.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620 مان ليڪيس جا ڪائنيٽڪ پيرا ميٽرز (ڪلوميٽر ۽ Vmax) لائين ويور-برڪ پلاٽ (شڪل 5) کي پلاٽ ڪندي گراف پيڊ پرزم 6.0 سافٽ ويئر استعمال ڪندي طئي ڪيا ويا. جڏهن ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪيو ويو، نتيجا 1.99 mM ۽ 16217 μmol هئا.منٽ¹ ل⁻¹،ترتيب وار. السيد وغيره.21رپورٽ ڪئي وئي ته ABTS آڪسائيڊشن لاءِ ڪلوميٽر ويليوز ترتيب وار 0.1 ايم ايم ۽ 0.064 ايم ايم هئا، جيڪو ABTS لاءِ Lac A ۽ Lac B آئسو اينزائمز جي اعليٰ لاڳاپي کي ظاهر ڪري ٿو. ان کان علاوه، Vmax ويليوز 0.182 μmol هئا.منٽ¹۽ 0.603 μmolمنٽ¹، ترتيب وار. حاصل ڪيل ڪلوميٽر قدر ٽراميٽس پولي زونا WRF03 (8.66 mM) کان گهٽ هئي؛ وڌيڪ، انهن جي Vmax قدر (1429 mmol منٽ⁻¹) پڻ هئيهيٺيونجڏهن ABTS کي سبسٽريٽ طور استعمال ڪيو وڃي.33 ساڳئي طرح، Lentinus squarrosulus MR13 ۽ Trametes sp. AH28-2 laccase ڪنسنٽريشن جون Km قدرون ترتيب وار 0.0714 mM ۽ 0.025 mM هيون، ۽ Vmax قدرون 0.0091 mM منٽ−1 ۽ 0.67 mM منٽ−1 mg−1 هيون (ABTS جي نسبت)، ترتيب وار. 56,57
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 مان ليڪيس جي سرگرمي تي ABTS ڪنسنٽريشن جو اثر جاچيو ويو، ۽ ABTS ڪنسنٽريشن جي مقابلي ۾ شروعاتي رد عمل جي رفتار جي باهمي تعلق جو هڪ لائن ويور-برڪ پلاٽ پلاٽ ڪيو ويو. ليڪيس جي مختلف ڪنسنٽريشن (0.025–3.0 mM) سان ABTS جي آڪسائيڊيشن رد عمل کي pH 4.5 تي ماپيو ويو ته جيئن ڪائنيٽڪ پيرا ميٽرز (Vmax ۽ Km) کي طئي ڪري سگهجي. Michaelis-Menten ڪائنيٽڪ مستقلن جو حساب سبسٽريٽ ڪنسنٽريشن جي مقابلي ۾ رد عمل جي رفتار جي باهمي تعلق جي لائن ويور-برڪ پلاٽ استعمال ڪندي ڪيو ويو. گراف پيڊ پرزم 6.01 سافٽ ويئر استعمال ڪندي لائن ويور-برڪ پلاٽ مان ڪائنيٽڪ مستقلن جو حساب ڪيو ويو.
روايتي وضاحت ڪندڙ اينزائمز، جهڙوڪ پيڪٽينيز، پيڪٽڪ مادن کي هائيڊولائيز ڪن ٿا، ويسڪوسيٽي ۽ ٽربيڊيٽي کي گهٽائين ٿا. اهي اثرائتي طور تي ساختي پوليسيڪرائڊس کي ٽوڙين ٿا ۽ اڪثر ڪري ٻين اينزائمز، جهڙوڪ سيلوليز ۽ هيميسيلوليز سان ميلاپ ۾ استعمال ٿين ٿا، پيداوار ۽ وضاحت کي بهتر بڻائڻ لاءِ. تاهم، پيڪٽينيز خاص طور تي فينولڪ مرڪبن کي نشانو نه بڻائين ٿا، جيڪي ٽربيڊيٽي ۽ آڪسيڊيٽو براؤننگ ۾ مکيه ڪردار ادا ڪن ٿا، خاص طور تي سيب ۽ انگور جي رس جهڙن رسن ۾.58ان جي ابتڙ، ليڪيسز فينولڪ مرڪبن جي آڪسائيڊيشن کي متحرڪ ڪن ٿا، انهن کي وڏن، غير حل ٿيندڙ ماليڪيولن ۾ پوليمرائيز ڪن ٿا جيڪي سيڊيمينٽيشن يا فلٽريشن ذريعي هٽائي سگهجن ٿا. هي ميڪانيزم نه رڳو وضاحت کي بهتر بڻائي ٿو پر فينولڪ مرڪبن جي ڪري آڪسائيڊيوٽو براؤننگ جي امڪان کي گهٽائي رس جي شيلف لائف کي به وڌائي ٿو. ان کان علاوه، ليڪيس تي ٻڌل وضاحت جا عمل نرم پروسيسنگ حالتن (pH 3.5-5.5، گرمي پد 25-40 °C) هيٺ ڪري سگهجن ٿا، انهن کي نازڪ رس لاءِ مناسب بڻائي ٿو بغير انهن جي غذائي يا آرگنوليپٽڪ خاصيتن سان سمجهوتو ڪرڻ جي.59مطالعي مان ظاهر ٿيو آهي ته پيڪٽينيس علاج 1-2 ڪلاڪن ۾ رس کي صاف ڪري سگهي ٿو، جڏهن ته ليڪيس علاج عام طور تي فينولڪ مرڪب کي مڪمل طور تي گهٽائڻ لاءِ هڪ ڊگهو رد عمل وقت (3-6 ڪلاڪ) جي ضرورت هوندي آهي. بهرحال، هن عمل کي اينزائم کي متحرڪ ڪرڻ يا ليڪيس کي ميڪيڪل وضاحت طريقن سان گڏ ڪرڻ سان بهتر بڻائي سگهجي ٿو.60هن مطالعي ۾، خام ڪڍڻ جي اينزائم پروفائلنگ اهم ليڪيس ۽ α-اميليس سرگرمين کي ظاهر ڪيو، جڏهن ته پيڪٽينيس ۽ زائلينيس سرگرميون انتهائي گهٽ هيون، ۽ سيلوليس سرگرمي جو پتو نه پيو. تنهن ڪري، ٽربيڊيٽي ۽ فينولڪ مواد ۾ گهٽتائي بنيادي طور تي ليڪيس جي عمل جي ڪري هئي، جڏهن ته ويسڪوسيٽي ۾ تبديلي جزوي طور تي ايميليس جي عمل جي ڪري ٿي سگهي ٿي.
جدول 1 تازي نچوڙيل سيب جي رس ۽ ليڪيس سان علاج ڪيل نمونن جي جسماني ڪيميڪل پيرا ميٽرز کي ڏيکاري ٿو. نتيجن مان ظاهر ٿيو ته تازي نچوڙيل سيب جي رس جي پيداوار (71.59٪) ليڪيس سان علاج ڪيل نمونن (87.34٪) کان گهٽ هئي. اهي نتيجا پلنڪ ۽ اورينج جي نتيجن سان مطابقت رکن ٿا.61، جنهن اشارو ڪيو ته ميوي جي پروسيسنگ ۾ اينزائمز جو استعمال رس جي پيداوار وڌائي سگھي ٿو، فلٽريشن کي بهتر بڻائي سگھي ٿو، ۽ ڪنسنٽريشن لاءِ اعليٰ معيار جو، صاف رس حاصل ڪري سگھي ٿو. رس جي پيداوار ۾ اضافو بنيادي طور تي رس ۾ حل ٿيندڙ شگر جي مواد ۾ واڌ جي ڪري آهي. ميون جي اينزيميٽڪ هائيڊولائيزيشن دوران، پيداوار جي سيل والز ۾ ميسوگليا ۽ پيڪٽين تباهه ٿي ويندا آهن ۽ حل ٿيندڙ مادن جهڙوڪ غير جانبدار شگر ۽ تيزاب ۾ تبديل ٿي ويندا آهن.62.اينزائم سان علاج ڪيل سيب جي رس جي پي ايڇ ويليو ڪنٽرول گروپ (پي < 0.05) جي ڀيٽ ۾ تمام گهٽ هئي، ۽ اسٽوريج دوران ٻنهي گروپن جي پي ايڇ ويليو ۾ خاص طور تي اضافو ٿيو (ٽيبل 1). اهي نتيجا مارڪ ۽ ٻين جي نتيجن سان مطابقت رکن ٿا.63، جنهن نوٽ ڪيو ته ڪاجو جي رس جو پي ايڇ گرمي علاج کان پوءِ اسٽوريج کان پوءِ گهٽجي ويو. اينزائم علاج کان پوءِ پيڪٽين جي خرابي ۽ گليڪٽورونک ايسڊ ٺهڻ اسٽوريج دوران پي ايڇ ۾ واڌ جو ذميوار ٿي سگهي ٿو. اينزائم علاج ٿيل نمونن جو پي ايڇ اسٽوريج دوران 4.05 ۽ 4.31 جي وچ ۾ رهيو، جڏهن ته علاج نه ٿيل سيب جي رس جو پي ايڇ 4.12 ۽ 4.33 جي وچ ۾ رهيو.
علاج نه ٿيل ۽ ليڪيس سان علاج ٿيل نمونن جي ڪل تيزابيت (TA) ۾ اسٽوريج جي وقت ۾ واڌ سان گهٽتائي جو رجحان ڏيکاريو ويو (ٽيبل 1). تيزابيت ۾ گهٽتائي نامياتي تيزابن جي ڪاربوهائيڊريٽ ۾ تبديلي يا اينزيميٽڪ رد عمل، انهي سان گڏ رس جي اسٽوريج دوران آڪسائيڊيشن جي ڪري هئي.64ڪنٽرول ايپل جوس ۽ اينزائم سان علاج ڪيل نمونن جي ڪل تيزابيت ٻين جوس (اسٽرابيري جوس 0.9٪، آلو بخارا جوس 2.2٪، ڪمڪوٽ جوس 1.0٪، خوباني جوس 2.4٪، نارنگي جوس 0.8٪) جي ڀيٽ ۾ گهٽ هئي، پر ٻين جوس (مثال طور، ناشپاتي جوس 0.3٪) جي برابر هئي.62علاج نه ٿيل تازي نچوڙيل سيب جي رس ۾ اهي فرق مختلف عنصرن جي ڪري ٿي سگهن ٿا جهڙوڪ وڌندڙ حالتون، جينياتي عنصر، پختگي جي سطح، ۽ پروسيسنگ طريقا.65ڪنٽرول ۽ ليڪيس سان علاج ٿيل سيب جي رس جي ڪل تيزابيت ۾ گهٽتائي سنگهه ۽ ٻين پاران پيش ڪيل نتيجن سان مطابقت رکي ٿي.6674 ڏينهن جي اسٽوريج کان پوءِ جن نو سيب جي رس جي ڪل تيزابيت ۾ گهٽتائي بابت. ٻئي طرف، اوشميانسڪي ۽ ووجڊيلو67روايتي وضاحت جي طريقن جي اثر جو مطالعو ڪندي سيب جي رس جي تيزابيت ۾ ڪا خاص تبديلي نه ملي.
جدول 1 ۾ پيش ڪيل نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته ليڪيس سان علاج ٿيل سيب جي رس جي ڪل حل ٿيندڙ سولڊس (TSS) جي قيمت غير علاج ٿيل نموني کان وڌيڪ هئي. اهي نتيجا شايع ٿيل مطالعي سان مطابقت رکن ٿا.. 68وڌيڪ، جدول 1 ڏيکاري ٿو ته ڪنٽرول ايپل جوس گروپ جي TSS ويليو شروعاتي وقت جي نقطي تي 9.58 هئي ۽ اسٽوريج جي مدت جي آخر تائين 11.05 تائين پهچي وئي. اهي ويليو حامد ۽ ٻين پاران رپورٽ ڪيل تازي ايپل جوس جي TSS ويليو کان گهٽ آهن.. 69(ترتيب وار 11.2 ۽ 11.80). ليڪيس سان علاج ٿيل سيب جي رس جي نمونن جي TSS قدر ۾ خاص طور تي اضافو ٿيو، 11.23 کان شروع ٿي ۽ 4°C تي ٻن هفتن جي اسٽوريج کان پوءِ 12.93 تائين پهچي ويو (ٽيبل 1). اسٽوريج دوران TSS ۾ ساڳيو اضافو ليمن جي ميون، ليمن ۽ مٺي نارنگي ۾ پڻ ڏٺو ويو. اسٽوريج دوران ڪل حل ٿيندڙ ٺوس (TSS) ۾ واڌ شايد پولي سيڪرائڊز (نشاستي) جي مونو سيڪرائڊز (کنڊ) ۾ هائيڊولائيزيشن، رس ڊي هائيڊريشن جي ڪري ڪنسنٽريشن ۾ واڌ، ۽ رس ۾ پيڪٽين جي حل ٿيندڙ ٺوس ۾ گهٽتائي جي ڪري ٿي سگهي ٿي. ڪل حل ٿيندڙ ٺوس (TSS) ۾ واڌ ممڪن طور تي حل ٿيندڙ شگر ۾ واڌ جي ڪري آهي، جيڪا ترتيب وار پيڪٽين يا سيلولوز ذريعي پيڪٽين يا سيلولوز کي حل ٿيندڙ شگر ۾ تبديل ڪرڻ سان، يا نشاستي جي هائيڊولائيزيشن ذريعي شگر ۾ تبديل ٿي سگهي ٿي، جيئن حميد ۽ ٻين پاران رپورٽ ڪئي وئي آهي.69.سيب جي رس جي خاصيتن تي ليڪيس جو اثر بصري طور تي ڏسي سگهجي ٿو، ڇاڪاڻ ته ليڪيس سان علاج ڪيل سيب جو رس بهتر وهڪري جي صلاحيت ۽ علاج نه ٿيل رس جي ڀيٽ ۾ گهٽ ويسڪوسيٽي ڏيکاري ٿو. هي مشاهدو جدول 1 ۾ درج ڪيو ويو آهي؛ اينزائم سان علاج ڪيل نموني جي ويسڪوسيٽي 1.87 سي پي هئي، جڏهن ته ڪنٽرول نموني جي ويسڪوسيٽي 2.95 سي پي هئي. ويسڪوسيٽي ۾ هي اهم گهٽتائي ممڪن طور تي پيڪٽين جهڙين مادن جي وڌيڪ پاڻي رکڻ جي صلاحيت ۽ هڪ مربوط نيٽ ورڪ جي جوڙجڪ جي ٺهڻ جي ڪري آهي.
هن مطالعي ۾، سيب جي رس جي براؤننگ انڊيڪس (BI) تي ليڪيس جي اثر جي جاچ اسپيڪٽرو فوٽوميٽر استعمال ڪندي 420 nm تي جذب کي ماپڻ سان ڪئي وئي. نتيجا جدول 1 ۾ ڏيکاريا ويا آهن. اسٽوريج دوران، علاج ٿيل ۽ علاج نه ٿيل ٻنهي گروپن ۾ سيب جي رس جي نمونن جي BI ۾ بتدريج وڌندڙ رجحان ڏيکاريو ويو. BI براؤننگ جي درجي کي ظاهر ڪري ٿو ۽ ڪم ڪري سگهي ٿوهڪ اهماينزيميٽڪ ۽ غير اينزيميٽڪ براؤننگ رد عمل جو اشارو. اسٽوريج دوران جذب ۾ خاص طور تي اضافو ٿيو (P < 0.05). اسٽوريج جي آخر ۾،اي 420ڪنٽرول ۽ اينزائم سان علاج ڪيل گروپن ۾ سيب جي رس جي نمونن جي قيمت ۾ ترتيب وار 217٪ ۽ 121٪ اضافو ٿيو (ٽيبل 1). نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته اينزائم علاج مؤثر طريقي سان براؤننگ ڊگري کي تقريباً 56٪ گهٽائي سگهي ٿو. بيزيرا ۽ ٻين جا نتيجا.[19]] اسان جي نتيجن سان مطابقت رکن ٿا؛ انهن سيب جي رس کي صاف ڪرڻ لاءِ ليڪيس-گلوٽارالڊيهائيڊ-ناريل فائبر استعمال ڪيو، ان جي اصل رنگ کي 61٪ گهٽائي ڇڏيو.
جيتوڻيڪ ميوي جي رس ۾ موجود پولي فينول انساني جسم تي مثبت غذائي ۽ علاج جا اثر رکن ٿا، پر اهي پروٽين سان پڻ رد عمل ڪري سگهن ٿا، جنهن جي ڪري رس ۾ بادل، تلخي، يا گندگي پيدا ٿئي ٿي، جنهن جي ڪري پيداوار جو ذائقو ۽ خوشبو تبديل ٿئي ٿي ۽ ان جي شيلف لائف گهٽجي ٿي.71هن مطالعي جو مقصد پليوروٽس اوسٽريٽس اين آر سي 620 مان لِڪيس استعمال ڪندي سيب جي رس ۾ فينولڪ مرڪب جي مواد کي محفوظ طور تي گهٽائڻ هو. جدول 1 ۾ پيش ڪيل نتيجا ڏيکارين ٿا ته لِڪيس سان علاج ٿيل سيب جي رس جي ڪل فينولڪ مرڪب جي مواد کي 4 °C تي اسٽوريج کان اڳ خاص طور تي گهٽايو ويو هو. ان کان علاوه، مطالعي ڪيل ٻنهي نمونن ۾ اسٽوريج دوران ڪل فينولڪ مرڪب جي مواد ۾ پڻ گهٽتائي آئي (ٽيبل 1). سينڊري ۽ ٻين پاران تحقيق.72ڏيکاريو ويو ته اينزائم سان علاج ٿيل سيب جو رس پنهنجي اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ۽ فينولڪ مرڪب جي مواد کي برقرار رکي سگهي ٿو. بهرحال، ليٽرا ۽ ٻين جي هڪ مطالعي جا نتيجا.73ڏيکاريو ته نارنگي جي رس جو فنگل لڪسيس سان علاج ڪرڻ سان ان ۾ فينولڪ مرڪبن جي مقدار کي 45 سيڪڙو تائين گهٽائي سگهجي ٿو.
فينولڪ مرڪبن ۾ فري ريڊيڪل اسڪيوينگنگ، سنگلٽ آڪسيجن گهٽائڻ ۽ ڪونچنگ، هائيڊروجن ايٽم جي منتقلي، ۽ فري ريڊيڪلز کي اليڪٽران عطيو ڪرڻ جهڙيون خاصيتون ڏيکاريون ويون آهن، جيڪي انهن کي طاقتور اينٽي آڪسيڊنٽ بڻائين ٿيون.74تنهن ڪري، هن مطالعي ۾، DPPH ۽ FRAP تي ٻڌل طريقا استعمال ڪيا ويا ته جيئن 14 ڏينهن تائين ريفريجريٽر ۾ رکيل سيب جي رس جي اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي تي ليڪيس جي اثر جو جائزو ورتو وڃي (ٽيبل 2). ٻنهي طريقن اسٽوريج دوران اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ۾ اضافو ڏيکاريو، جيڪو شايد مفت فينولڪ مرکبات ۾ واڌ يا ميلارڊ رد عمل جي شين (MRPs) جي ٺهڻ جي ڪري هجي، ميلارڊ رد عمل جي شين ۾ اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ۾ واڌ جو سبب هجڻ جو امڪان آهي.75غير اينزيميٽڪ براؤننگ رد عمل (جنهن ۾ ايسڪربڪ ايسڊ ڊيگريڊيشن، ميلارڊ ري ايڪشن، ۽ تيزابي-ڪيٽيلائيزڊ شگر ڊيگريڊيشن شامل آهن) ڀوري رنگ (ميلانائيڊين) پيدا ڪن ٿا. وچولي ايسڪربڪ ايسڊ ڊيگريڊيشن پراڊڪٽس ۽ کنڊ ڊيگريڊيشن پراڊڪٽس (جهڙوڪ ڪاربونيل مرڪب) ميلارڊ ري ايڪشن ذريعي امينو ايسڊ سان رد عمل ڪري سگهن ٿا.76جيتوڻيڪ ميون ۽ ڀاڄين جي اسٽوريج دوران ڀورو ٿيڻ جو وڏي پيماني تي مطالعو ڪيو ويو آهي، پر انهن رد عملن بابت اسان جي سمجھ محدود رهي ٿي.77FRAP طريقي جي مقابلي ۾، ليڪيس سان علاج ٿيل سيب جو رس DPPH طريقي سان گهٽ اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي ڏيکاري ٿو (ٽيبل 2)، ۽ سڀني نمونن جي اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي اسٽوريج جي وقت ۾ واڌ سان خاص طور تي وڌي وئي. هن مطالعي ۾ اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي کي طئي ڪرڻ لاءِ ٻه مختلف طريقا استعمال ڪيا ويا ڇاڪاڻ ته انهن جا اصول مختلف آهن. DPPH طريقو آزاد ريڊيڪلز کي غير جانبدار ڪرڻ جي صلاحيت کي ماپي ٿو، جڏهن ته FRAP طريقو لوهه جي آئن کي گهٽائڻ جي صلاحيت کي ماپي ٿو. تنهن ڪري، مطالعي ڪيل نمونن جي اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي کي بهتر سمجهڻ لاءِ اينٽي آڪسيڊنٽ سرگرمي کي طئي ڪرڻ لاءِ ڪيترائي طريقا استعمال ڪرڻ جي سفارش ڪئي وئي آهي.78
هن مطالعي جي اهم نتيجن مان هڪ اهو آهي ته *Pleurotus ostreats* laccase NRC 620 70°C ۽ pH 3.0 تي بهترين سرگرمي ڏيکاري ٿو. عام طور تي رس جي وضاحت لاءِ استعمال ٿيندڙ ٻين فنگل ليڪيز جي مقابلي ۾، جهڙوڪ *Trametes versicolor* ۽ *Ganoderma lucidum* laccases، *P. ostreats* NRC 620 وڌيڪ حرارتي استحڪام ۽ وڌيڪ تيزابي pH ڏيکاري ٿو. *Trametes versicolor* ۽ *Ganoderma lucidum* جا ليڪيز عام طور تي 50-60°C جي حد ۾ ۽ 3.5 ۽ 5.0 جي وچ ۾ pH قدرن تي بهترين سرگرمي ڏيکاريندا آهن. هي فرق بهتر رس جي وضاحت جي ڪارڪردگي ۾ حصو وٺي سگھي ٿو، خاص طور تي تيزابي رس لاءِ جتي گهٽ pH قدرن تي استحڪام اهم آهي. *P. جي منفرد خاصيت ٻين مطالعي ڪيل فنگل ليڪيز جي مقابلي ۾، *Pleurotus ostreats* NRC 620 وڌيڪ مشڪل حالتن ۾ مؤثر طريقي سان ڪم ڪرڻ جي صلاحيت ڏيکاري ٿو. ان جو وڌيڪ بهترين سرگرمي گرمي پد صنعتي ايپليڪيشنن ۾ امڪاني فائدن جو مشورو ڏئي ٿو، جهڙوڪ تيز رد عمل جي شرح ۽ گھٽ مائڪروبيل آلودگي. ان جو گهٽ پي ايڇ، جيڪو ڪيترن ئي جوس جي تيزابي نوعيت لاءِ مناسب آهي، رس جي وضاحت جي عملن ۾ ڪارآمد ٿي سگهي ٿو. اهي نتيجا وڏي پيماني تي استعمال لاءِ وڌيڪ ڳولا کي جائز قرار ڏين ٿا، *Pleurotus ostreats* NRC 620 کي روايتي فنگل ليڪيس ذريعن لاءِ هڪ قابل عمل متبادل بڻائين ٿا. پوئين مطالعي جي مقابلي ۾، اسان ڏٺو ته بهترين گرمي پد 60 ° C آهي ۽ بهترين پي ايڇ 3.0 آهي. 80 منٽن لاءِ 60 ° C تي رد عمل کان پوءِ، *Ganoderma lucidum* ليڪيس برقرار رکيو ويو.46ان جي سرگرمي جو %.79 ڪرنياوتي ۽ نيڪيل جي مطابق80، *گانوڊرما لوسيڊم* اينزائمز 25°C تي بهترين کان اعتدال پسند استحڪام ۽ 5.0 کان 8.0 تائين pH قدرن، ۽ 6.0 ۽ 10 کان 30°C تائين گرمي پد تي استحڪام ڏيکارين ٿا. هن مطالعي ۾، اسان ڏٺو ته *پليوروٽس اوسٽريٽس* لاءِ اينزائم سرگرمي لاءِ بهترين pH ۽ گرمي پد ترتيب وار 3.0 ۽ 70°C هو. ٻن ڪلاڪن لاءِ 40°C ۽ 50°C تي انڪيوبيشن کان پوءِ، اينزائم پنهنجي سرگرمي جو 68.33% ۽ 59.61% برقرار رکيو. ان کان علاوه، پليوروٽس اوسٽريٽس NRC 620 ليڪيس 50°C کان 80°C تائين وسيع درجه حرارت جي حد تي اعليٰ سرگرمي ڏيکاري، تقريبن وڌ ۾ وڌ سرگرمي (69%–98%) تائين پهچي وئي، وڌ ۾ وڌ سرگرمي 70°C تي ڏٺي وئي.
نتيجي ۾، جامد حالتن ۾ حاصل ڪيل اويسٽر مشروم ليڪيس NRC620، پي ايڇ ۽ گرمي پد جي حالتن جي هڪ حد ۾ بهترين سرگرمي ۽ استحڪام جو مظاهرو ڪيو، ٻين اينزائم ذريعن جي مقابلي ۾ بهترين استحڪام جو مظاهرو ڪيو. 10 ملي ميٽر MgSO₄ ۽ CuSO₄ جي اضافي سان اينزائم جي سرگرمي ۾ ترتيب وار تقريبن 21٪ ۽ 35٪ اضافو ٿيو. جڏهن سيب جي رس ۾ پروسيس ڪيو ويو، ته اينزائم پي ايڇ ۽ ويسڪوسيٽي کي گهٽايو، جڏهن ته اسٽوريج دوران فينولڪ مواد صرف ٿورو گهٽجي ويو.
نتيجا کاڌي جي صنعت ۾، خاص طور تي مشروبات جي وضاحت ۾، ليڪيس جي صلاحيت جي تصديق ڪن ٿا. خاص طور تي فينولڪ مرکبات کي ٽوڙڻ سان، ليڪيس نه رڳو گندگي کي گھٽائي ٿو ۽ وضاحت کي بهتر بڻائي ٿو پر نرم آپريٽنگ حالتن ۾ ميوي جي رس جي معيار کي پڻ برقرار رکي ٿو. جليٽين، بينٽونائيٽ، ۽ سليڪا جيل جهڙن روايتي صاف ڪندڙ ايجنٽن جي برعڪس، ليڪيس فضول پيدا نٿو ڪري ۽ نه ئي مشروبات مان خوشگوار خوشبو ختم ڪري ٿو، ان کي وڌيڪ ماحول دوست ۽ پائيدار آپشن بڻائي ٿو. ان کان علاوه، ٻين اينزائمز ۽ فلٽريشن طريقن جي مقابلي ۾، ليڪيس پيداوار جي معيار سان سمجهوتو ڪرڻ کان سواءِ هڪ نشانو ۽ قيمتي اثرائتي حل پيش ڪري ٿو.
ڪيوموهيمبو، ايڇ ڊي ۽ برنڪ، ايڇ جي. ٽامي تي مشتمل ليڪيسس جي ايپليڪيشن ۽ متحرڪ ڪرڻ جون حڪمت عمليون؛ هڪ جائزو. هيليون 9، e13156 (2023).
پوسٽ جو وقت: ڊسمبر-15-2025